Guayaquil es la ciudad más poblada del Ecuador, con cerca de 2,7 millones de habitantes. Desde 2017, la AFD está colaborando con el Municipio de Guayaquil para combatir el cambio climático y lograr un desarrollo urbano inclusivo, mediante dos proyectos que promueven una movilidad urbana sostenible: con la Aerovía, primer transporte urbano por cable aéreo (teleférico) que atraviesa un río en América Latina, y permite conectarse en 17 min - en lugar de 1h por un puente frecuentemente congestionado - del centro de Guayaquil a su ciudad vecina, Durán. De otro lado, el Plan Maestro de Espacios Verdes de Guayaquil, financiado en alianza con la UE y la CAF, permite desarrollar una estrategia de mitigación al cambio climático en los espacios públicos, impulsando mejoras para la micro movilidad, como son el peatón y el ciclista. 
En 2019, la AFD otorgó un préstamo soberano de 84MUSD a la empresa municipal de agua y saneamiento de Guayaquil EMAPAG, para financiar la ampliación del sistema de saneamiento en barrios desfavorecidos del noroeste de la ciudad. Estas inversiones, que mejorarán la calidad de vida de 140.000 habitantes, permitirán al municipio alcanzar el Objetivo de Desarrollo Sostenible número 6 de acceso universal a agua y saneamiento. La AFD también participa en el Plan de Conservación de la Cuenca del Río Daule, para garantizar la seguridad hídrica en la región, a través de la cooperación con la ONG The Nature Conservancy, que tiene como objetivo establecer áreas de conservación y restauración y fortalecer así las capacidades del Fondo de Agua de Guayaquil.
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